Лигацияны трансформациялоо канча турат?

2024 Автор: Miles Stephen | [email protected]. Акыркы өзгөртүү: 2023-12-15 23:38

Трансформация . 1-5 мкл ортосунда кошуу байлоо компетенттүү клеткаларга аралаштыруу трансформация . Узартылган байлоо PEG менен төмөндөшүнө алып келет трансформация натыйжалуулук (Тез Лигация комплект). Электропорация чоң конструкциялар үчүн сунушталат (>10,000 bp).

Бул жерде, трансформация үчүн мага канча лигация продуктусу керек?

Трансформация . 1-5 мкл ортосунда кошуу байлоо компетенттүү клеткаларга аралаштыруу трансформация . Узартылган байлоо PEG менен төмөндөшүнө алып келет трансформация натыйжалуулук (Тез Лигация комплект). Электропорация чоң конструкциялар үчүн сунушталат (>10,000 bp).

Андан кийин суроо туулат, Лигация жана трансформация деген эмне? Кадимки клондоо экспериментинде изилдөөчүлөр алгач плазмид деп аталган ДНКнын тегерек бөлүгүнө ген сыяктуу ДНКнын бир бөлүгүн киргизишет. Бул кадам чектөө ферменттерин жана ДНК лигазасын колдонот жана а деп аталат байлоо . Кийин байлоо , кийинки кадам деп аталган процессте ДНКны бактерияга өткөрүп берүү трансформация.

Кийинчерээк, кимдир бирөө, байламта үчүн канча ДНК керек деп сурашы мүмкүн?

Натыйжалуу болушу үчүн вектордун + киргизүүнүн жалпы концентрациясы 1-10 Μг/мл ортосунда болушу керек байлоо . Вектор: 1:1 жана 1:10 ортосундагы молярдык катыштарды киргизүү сунушталат (1:3 типтүү). Эгер сиз өзүңүзгө ишенбесеңиз ДНК концентрациялары, ар кандай катыштар менен бир нече ligations аткаруу.

Лигациялык реакцияны канча убакытка чейин сактай аласыз?

Лигациялар болот бөлмө температурасында же муздак (12-16 ° C деп ойлойм) түнү же бир нече күн үчүн жасалат Эгер сен чындап бош эмес. Сенин колуңдан келет ошондой эле ligation сактоо муздаткычка салып, кийинчерээк алып чыгып, бөлмө температурасында байлап улантыңыз узун керек болсо.